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TOP10F` Chemically Competent Cell 產品說明書

產品規(guī)格

TOP10F`:                                             10×100μl

pUC19 (control vector):  10 pg/μl             10μl

保存條件：-80℃

基因型

F′{lacI^q Tn10 (Tet^r)} mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 araD139 ?(ara-leu)7697 galUgalK rpsL endA1 nupG

產品說明

TOP10F`菌株來源于TOP10菌株。將F`{lacIq Tn10 (Tet^r)}因子轉入TOP10菌株，即為TOP10F`。該F`因子攜帶lacI^q 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動子下游基因的表達，從而可以用于一些表達毒性蛋白質粒的擴繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取?？捎糜跇嫿寺?，藍白斑篩選（如用于藍白斑篩選，需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導β-半乳糖苷酶基因的表達）實驗，具有四環(huán)素抗性。TOP10F`感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. TOP10F`感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。